尊龙凯时的可溶性E选择素(sE-selectin) ELISA试剂盒仅限于科学研究 purposes,不应用于医学诊断。以下是试剂盒的使用说明及实验检测原理。
本试剂盒采用双抗体一步夹心法进行酶联免疫吸附试验(ELISA)。实验过程中,首先将样本、标准品和HRP标记的检测抗体依次加入事先包被了adropin(AD)抗体的微孔中,经过温育后需彻底洗涤。随后,利用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化作用下,转变为蓝色,并在酸性条件下最终呈现黄色。样品中adropin(AD)的浓度与颜色深浅成正相关。
参照酶标仪的性能,需在450nm波长下测定吸光度(OD值),从而计算样品的浓度。
样品收集、处理及保存方法
1. 血清:需使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激。收集血液后,进行3000转离心,持续10分钟,以快速小心地分离血清与红细胞。
2. 血浆:使用EDTA、柠檬酸盐或肝素抑制凝血,之后3000转离心30分钟,取上清。
3. 细胞上清液:通过3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆:将适量生理盐水与组织混合,搅拌捣碎。然后3000转离心10分钟,取上清。
5. 保存:如果样本收集后未能及时检测,应将样本按一次用量分装,存放于-20℃以避免反复冻融。在室温下解冻时,要确保样品均匀且完全解冻。
试剂的准备和操作注意事项
注意:标准品(S0-S5)的浓度依次为:0、25、50、100、200、400 pg/mL。
洗涤缓冲液配制:将蒸馏水按1:20稀释,即1份的20×洗涤缓冲液加19份蒸馏水。
结果判断
通过绘制标准曲线可分析结果:在Excel工作表中,以标准品浓度为横坐标,对应的OD值为纵坐标,绘制标准品的线性回归曲线,并据此曲线方程计算各样本浓度值。
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