尊龙凯时提供的人骨肉瘤细胞HOS培养指南，旨在为研究人员提供详尽的细胞培养操作步骤和注意事项，以确保细胞的顺利生长与应用。本文将从细胞培养条件、细胞处理、培养步骤、注意事项以及售后条款几个方面进行详细说明。

一、细胞培养条件

细胞名称：人骨肉瘤细胞HOS

生长特性：贴壁生长

冻存条件：无血清冻存液

培养体系：MEM培养基添加10% FBS、1% NEAA及1% P/S

传代方法：第一次建议以1:2比例进行传代；在传代后，每两天更换培养液。

备注：请使用无菌离心管收集培养基，以便进行对比实验。如果对比效果不佳，建议购买尊龙凯时的完全培养基。

二、细胞收到后的处理

收到了细胞后，建议培养至良好状态，灌满完全培养液并封好瓶口，这是确保运输细胞成功的最佳方式。使用75%酒精对整个细胞瓶进行消毒后，将其放置于超净台内进行无菌操作。随后，将细胞瓶放入37℃，5% CO2培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态后再进行处理。使用显微镜观察细胞生长情况，并拍照保存（最好分别在40x、100x、200x下各拍一张）。前三天的照片将在售后中作为重要依据，未提供照片的，默认收到状态良好。建议传代时，一瓶使用原瓶的完全培养基，另一瓶使用自配的培养基进行对比。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

若细胞汇合度未超过80%，请将培养液收集至离心管中，留5ml完全培养基于37℃、5% CO2孵箱培养。若细胞密度超过80%，请参照以下步骤进行传代：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS冲洗细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞状态。若细胞大部分变圆并脱落，迅速轻敲瓶体后加入5ml以上的完全培养基终止消化。
3. 轻轻吹打细胞使其完全脱落后吸出，并将悬液转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟，弃去上清液，加入1-2ml的完全培养基进行重悬。
4. 按1:2的比例进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至每瓶5-8ml，最后放入37℃、5% CO2细胞培养箱中继续培养。

b. 细胞冻存

1. 细胞生长至覆盖培养瓶80%面积时，弃去培养液，用PBS清洗细胞一次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，待细胞回缩变圆后加入5ml完全培养基终止消化，轻轻吹打使细胞脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，沉淀细胞后加入1ml尊龙凯时无血清冻存液（货号：C7001），混匀后加入冻存管中。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱，如果后续要转入液氮罐，需在-80℃冰箱中存放超过24小时后再转入液氮罐。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出细胞冻存管（注意佩戴防护面具），快速将其置入37℃水浴中解冻，至冻存管中无结晶后，使用75%的酒精擦拭管外壁。
2. 将冻存管内的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清后，用5ml完全培养基重悬细胞，接种至T25培养瓶中，并放入37℃、5% CO2细胞培养箱继续培养。
4. 第二天，换用新鲜完全培养基继续培养。

四、注意事项

细胞在运输过程中若出现脱落现象属正常。但若脱离较多，请收集培养液至离心管，1000RPM离心5分钟以作过渡培养。沉淀后加入胰酶1-2ml，轻轻吹打重悬，消化1-2分钟后再加入5ml完全培养基终止消化。然后，再次离心，重悬细胞并按1:2比例进行分瓶传代，补充新的完全培养基至每瓶5-8ml，最后放入37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。

五、售后条款

若细胞出现问题，客户可根据以下情况申请重发：

1. 运输途中细胞丢失、瓶身破损或培养液严重漏液等问题。
2. 细胞在收到48小时内出现污染，需提供真实实验结果以核实。
3. 常温发货或干冰冻存细胞在解冻后数小时未存活，需提供细胞状态照片。
4. 细胞活性问题，需在收到产品7天内通过台盼蓝染色法确认并提供结果。
5. 在细胞收到后2-3天内拍照作为依据。

出现问题但不予重发的情况包括客户操作不当、培养体系不合适等。具体情况可与我们进行协商。

选择尊龙凯时的人骨肉瘤细胞HOS，确保在科研工作中获得最佳的支持与保障！