在细胞体外培养中，污染如同潜伏的“隐形杀手”，始终威胁着实验的准确性与稳定性。在支原体、细菌和真菌这三大常见污染源中，支原体以30%-60%的超高污染率，成为科研人员的一大难题。本期文章将深度解析支原体污染的防治要点，助你轻松应对这一实验室“顽疾”，为细胞培养实验保驾护航。

什么是支原体？

支原体（Mycoplasma），又称霉形体，属于柔膜体纲（Mollicutes），是目前已知的最小的原核生物之一。其结构由脂蛋白膜、核糖体和圆形双链DNA组成，基因组大小为580-2,200kb。支原体可在无生命的培养基上生长，但其生物合成能力有限，需依赖外源营养成分。细胞培养体系为其提供了适宜的生长条件，是支原体的理想繁殖环境。此外，支原体可附着于宿主细胞表面长期繁殖存活，而对多种常见抗生素的耐药性也为污染隐患增添了一层屏障。

支原体污染的表现

自然界中支原体种类超过120种，而细胞培养中常见的污染菌株包括牛精氨酸支原体、发酵支原体等。支原体污染后，细胞会出现一系列特征性改变，如：1）细胞生长速率异常；2）细胞形态改变，粘附性减弱；3）染色体数目或结构异常；4）细胞膜抗原性改变；5）代谢通路紊乱；6）细胞复苏后的存活率降低。这些变化缺乏特异性，但会严重干扰细胞正常生理状态，导致实验结果失真。

支原体污染检测

精准检测是防治支原体污染的关键。目前常见的支原体检测方法包括观察法、培养法、免疫法等。其中，培养法为金标准，但操作周期较长，而qPCR是灵敏度最高的快速检测方法。

支原体清除方法

在细胞培养过程中，一旦发现支原体污染，及时有效的清除至关重要。清除支原体的核心在于破坏其脂蛋白膜结构，并抑制关键代谢途径。目前推荐的清除方法如下：

1）热处理法：支原体在35-37℃环境中生存，将污染细胞放置于41℃处理5-10小时可有效杀灭支原体，但需注意不同细胞对高温的耐受程度。

2）抗生素法：支原体对部分抗生素（如卡那霉素、庆大霉素等）具有敏感性，连续多次检测阴性即为成功。然而，需谨慎使用以避免耐药性或毒性反应。

3）复合型支原体清除试剂：推荐使用含有抗生素和脂蛋白膜穿透剂的复合型清除试剂，如尊龙凯时的Anti-Myc支原体清除试剂，通过破坏支原体膜和抑制DNA复制来达到清除效果。该方法简便、有效，对细胞毒性较小，有利于保持细胞活性。

结论

支原体虽然微小，但却是细胞培养中极具破坏性的污染源。唯有了解其特性、及时发现污染信号，并掌握合适的检测与清除手段，才能真正守护细胞实验的可靠性与稳定性。更多细胞培养相关的科研干货，请持续关注尊龙凯时！

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